牛肝菌接種要求是無菌操作，確保接種後成品率高，具體操作要求如下：
環境淨化：
採用接種室或接種箱、接種帳接種，事先應消毒，採用氣霧消毒劑，每立方米5-8克，點燃產生氣體消毒。
菌種預處理：
先拔掉菌種瓶口棉塞，用塑料袋包裹瓶或袋口，然後搬進接種室內，再用接種鏟伸入菌種瓶袋內，把表層老化菌膜挖出。如出現白色扭結團的質基也要挖出，並用棉球蘸75%酒精，擦淨瓶內壁四周，然後搬進接種室內。若是扎袋頭的菌種，開袋口同樣方法處理好菌種後，把袋口扭擰後搬進接種箱內接種。
接種無菌操作接種環節的無菌操作技術規程，主要掌握以下五個方面：
１：選擇時間選擇晴天午夜或清晨接種，此時氣溫低，雜菌處於休眠狀態，有利於提高菌袋接種的成品率。雨天空氣溼度大，容易感染黴菌，不宜進行接種。
２：接種物入室塑料袋搬人無菌室或接種帳內後，連同菌種、接種工具、酒精燈一起，進行第二次消毒。先用氣霧劑薰30分鐘以上，接種前40-60分鐘，再用紫外線燈照射30分鐘，達到無菌條件。工作人員穿戴工作服、帽和口罩及拖鞋。農家接種人員，要求洗淨頭髮並晾乾，更換於淨衣服，方可入室。接種前雙手用75%酒精擦洗或戴乳膠手套。
３：接種敏捷，袋料開啟袋口扎繩，若是套環棉塞的拔出棉塞。把菌種接人袋內，重新紮好袋口或棉塞復原封口。若是瓶栽的把瓶口覆蓋薄膜揭開，接種後復原。由於接種時開袋口，培養料暴露於空間，如果室內消毒不徹底，殘留雜菌孢子容易乘機而人；同時，接種時間延長，空間溼度相對升高，也容易引起感染。另一方面接種器具為金屬製品，久用易灼熱，菌種通過酒精燈火焰區時，如果動作緩慢，則容易燙傷菌種。
４：更新空氣，每一批料袋接種完畢，必須開啟門窗通風換氣30-40分鐘，然後關門窗，重新進行消毒，繼續接種。接種後如果不通風，由於室內酒精燈和人的體溫的影響，加上接種時開啟穴口，使料內水分蒸發，形成高溫、高溼，容易帶來雜菌的積累，勢必造成雜菌汙染。
５：清理殘留物，在接種過程中，菌種瓶的覆蓋膜廢棄物，尤其是工作臺及室內場地上的木屑等雜質，必須集中一角，不要亂扔。待每批料袋接種結束後，結合通風換氣，進行一次清除，以保持場地清潔，杜絕雜菌汙染。